通过我们的4宗范围,我们支持从研究中的研究跨越分子诊断的广118金宝搏app泛客户应用。生活科学继续开发高质量的创新耗材和仪器,专注于PCR塑料,测定微孔板和密封解决方案。188宝金博手机网址

我们的PCR,QPCR和测序管和板都涵盖了所有灵活性和自动化需求,成功旨在最大限度地减少试剂的浪费,并最大限度地提高效率。阅读更多▼

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我们的PCR,QPCR和测序管和板都涵盖了所有灵活性和自动化需求,成功旨在最大限度地减少试剂的浪费,并最大限度地提高效率。

补充PCR范围,我们的测定和储存微孔板支持各种应用,包括基于细胞的含量筛选和ELISA,荧光,发光和样品收集。118金宝搏app

由于每个板材和管都需要一封印章,我们自豪地为市场上提供最大的密封解决方案,包括粘合剂和热封,以及自动化和半自动微孔板密封仪器。

188宝金博手机网址布鲁克斯生命科学公司知道开放式对话可以促进创新:当你说话时,我们倾听。由于现货产品并不总是能满足客户的需求,我们完全开放地定制我们的目录范围,以满足您特定的实验室需求。阅读少▲

用于PCR和存储的低结合孔板

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聚丙烯(PP)是PCR管的最佳塑料材料,因为它是化学惰性的,耐溶剂,并且适用于注塑成型 - 允许生产薄壁管以获得最佳PCR结果。

尽管这种材料具有非常疏水的性质,但DNA已被证明可以与PP管结合,特别是在高离子强度下。不同的PP聚合物用于生产PCR消耗品,由于它们的特性不同,包括表面电荷,因此它们以不同的数量结合DNA。阅读更多▼

用于PCR和存储的低结合孔板

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图2.

聚丙烯(PP)是PCR管的最佳塑料材料,因为它是化学惰性的,耐溶剂,并且适用于注塑成型 - 允许生产薄壁管以获得最佳PCR结果。

尽管这种材料具有非常疏水的性质,但DNA已被证明可以与PP管结合,特别是在高离子强度下。不同的PP聚合物用于生产PCR消耗品,由于它们的特性不同,包括表面电荷,因此它们以不同的数量结合DNA。

与PP表面的DNA结合通常仅是反应管和储存容器的问题,但不适用于PCR / QPCR管。在变性步骤期间释放到管壁的DNA和/或仍然可用于扩增。

然而,由于进展体积小型化和具有新技术,例如下一代测序(NGS),越来越多地推荐用于可能需要超低DNA结合的其他应用的PCR / QPCR管。

  • 低结合特征由选定的低粘合聚合物产生,没有涂层用于达到结合特性
  • 样品没有污染或修改
  • 在宽温度范围内进行测试
  • 低温保存和高温培养后,DNA回收率最高
  • 在NGS样品制备和图书馆建设中孵育步骤和样品转移时没有DNA损失
  • 非常适用于具有超低DNA输入的敏感应用

实验数据

线性DNA与不同PP聚合物的结合

图1:线性DNA与不同PP聚合物的结合 - 实验设置
图1

实验装置

产生十倍DNA稀释系列含有线性1176bp产物(从质粒acta1,Ta克隆到PGEMT载体中消化)产生的DNA浓度为10ng /μl,1ng /μl,0.1ng /μl和0.010ng /μl。

将50μl的每种DNA浓度施加到PCR板上,并在37℃温育30分钟。然后将DNA转移到PCR板的下一排,再孵育30分钟。该程序重复七次,使DNA在8个不同的管中孵育共240分钟。所有转移步骤均用市售的低绑定尖端(康宁)进行。

随后使用IdT(集成DNA技术)设计的ACTA1引物和探针,对每种DNA浓度的µl进行qPCR分析,并与原始稀释序列的2µl进行比较(每次qPCR运行总DNA输入= 2 ng到0.002 ng)。

实验结果

比较了三块不同的PCR板:

  • a)具有由4抗性低结合PP聚合物制成的管的PCR板
  • b)具有由替代PP聚合物制成的管的PCR板和
  • c)来自竞争对手的低绑定板

图2为不同DNA浓度下的Ct值。蓝线为未在PCR管中培养的对照DNA的结果,红线为PCR管中培养的结果。δ ct用绿色表示。

图2:线性DNA与不同PP聚合物的结合 -  QPCR比较
图2.

对于不结合任何可检测的DNA迹线的塑料材料,红色和蓝线应该是相同的(对于Δct= 0),其不结合任何可检测的DNA痕迹(缩小差异可能导致移液不准确)。

4抗性低结合材料(A)显示几乎是理想的图案,唯一具有0.44循环的较小偏差为0.002ng /μl的最低DNA浓度为0.44个循环。

平行测试的替代内部PP聚合物(b)显示,在最低DNA浓度下,DNA结合的δ ct高达2.57个周期。从竞争对手E (c)的“低结合”PCR板上获得了一个惊人的相似模式,δ ct高达2.92个周期。

结果清楚地显示了4度低结合PP聚合物的优越性能,表明了敏感应用的优势,如下一代测序样品制备。

基因组DNA与不同温度低结合PP聚合物的结合

对四自由度低结合PP聚合物进行了进一步的实验。

图3:不同温度下基因组DNA与低结合PP聚合物的结合-示范标准曲线
图3.

使用小鼠基因组DNA(溶解在5mm Tris-HCl pH8.0)代替Acta1片段中的相同实验条件重复上述实验,代替acta1片段测试三种不同的孵育温度(4°C,作为反应混合物的典型储存温度,37°C作为酶反应的典型温度,65℃作为酶变性的典型温度)。使用Kapa Sybr Fast QPCR主混合物进行QPCR比较,具有相同的DNA浓度。

图3显示了从4℃温育所取的示例性标准曲线,显示出4种不同的输入浓度的CT值,用于孵育的样品与对照。其他温度的结果是可比的。

表1显示了所有不同实验条件的CT值 - 确认在8种不同的管中孵育的样品之间的几乎没有差异,总共240分钟,并且对照未进行PCR塑料表面。

Ct值 CT SD. ΔCt
孵化温度:4°C
20 ng / rxn 没有孵化19.97. 没有孵化0.01 -0.2
孵化19.77后 孵化后0.01
2 ng / rxn 没有孵化22.93 没有孵化0.08 -0.06.
孵育22.87后 孵化后0.05
0.2 ng / rxn 没有孵化26.44. 没有孵化0.03 -0.06.
孵育后26.38 孵化后0.05
0.02 ng / rxn 没有孵化29.61. 没有孵化0.14 0.25
孵化后29.86 孵育0.10
孵化温度:37°C
20 ng / rxn 没有孵化19.85. 没有孵化0.02 -0.21
孵化后19.64 孵化后0.05
2 ng / rxn 没有孵化22.93 没有孵化0.06 -0.16
孵育22.77后 孵化后0.05
0.2 ng / rxn 没有孵化26.28. 没有孵化0.03 0.10
孵育后26.37 孵化后0.05
0.02 ng / rxn 没有孵化29.49 没有孵化0.45 0.08
孵育29.57后 孵化后0.36
孵化温度:65°C
20 ng / rxn 没有孵化18.51. 没有孵化0.04 -0.73
孵化后17.78 孵化后0.01
2 ng / rxn 没有孵化21.41. 没有孵化0.003 -0.16
孵化后21.26 孵化后0.02
0.2 ng / rxn 没有孵化24.69. 没有孵化0.13 -0.18
孵化后24.51 孵化后0.03
0.02 ng / rxn 没有孵化28.57 没有孵化0.23 -0.42
孵化后28.15 孵化后0.56

表格1:基因组DNA在不同温度下的低结合PP聚合物的结合 - 所有不同实验条件的CT值

实验数据:通过我们的日本合作伙伴Nippon Genetics友好提供不同温度下DNA粘附的数据。

以下的低绑定板可订购现货,但额外的超低绑定性能的产品可根据要求提供。阅读少▲