通过我们的4titude系列,我们支持广泛的客户应用,从研118金宝搏app究到分子诊断。188宝金博手机网址布鲁克斯生命科学continue to develop high quality innovative consumables and instruments with a focus on PCR plastics, assay microplates, and sealing solutions.
我们的PCR, qPCR和测序管和板覆盖了所有的灵活性和自动化需求,成功地旨在减少试剂的浪费,最大限度地提高效率。
补充PCR范围,我们的测定和储存微孔板支持各种应用,包括基于细胞的含量筛选和ELISA,荧光,发光和样品收集。118金宝搏app
由于每个板和管都需要密封,我们自豪地为市场上提供最大的密封解决方案,包括粘合剂和热封,以及自动化和半自动微孔板密封仪器。
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用于PCR和储存的低结合微板
聚丙烯(PP)是聚合酶链反应管的最佳塑料材料,因为它具有化学惰性,耐溶剂,非常适合注射成型-允许生产具有最佳聚合酶链反应结果的薄壁管。
DNA已经被证明可以与PP管结合,特别是在高离子强度下,尽管这种材料具有非常疏水的性质。不同的PP聚合物用于聚合酶链反应消耗品的生产,由于它们的特性(包括表面电荷)不同,因此它们结合DNA的数量也不同。
DNA与PP表面的结合通常仅是反应管和储存容器的问题,但不适用于PCR / QPCR管。在变性步骤期间释放到管壁的DNA和/或仍然可访问扩增。
然而,由于体积的不断缩小和新技术,如下一代测序(NGS), PCR/qPCR管也越来越被推荐用于其他可能需要超低DNA结合的应用。
- 低结合特征来自于选择的低结合聚合物,不使用涂层来实现结合特征
- 样品不受污染或修改
- 在宽温度范围下测试
- 在低温储存和高温培养后DNA的最大回收率
- NGS样品制备和建库过程中,培养步骤和样品转移均无DNA丢失
- 非常适用于具有超低DNA输入的敏感应用
实验数据
线性DNA与不同PP聚合物的结合
实验装置
产生含有线性1176bp产物(从质粒acta1,Ta克隆到PGEMT载体中的抗体中消化)产生的十倍DNA稀释系列,得到10ng /μl,1ng /μl,0.1ng /μl和0.010ng /的DNA浓度为0.010ng /μl。
将50μl每种DNA浓度施加到PCR板上,并在37℃温育30分钟。然后将DNA转移到PCR板的下一行中另外30分钟孵育。该过程重复七次,使DNA在8种不同的管中孵育共240分钟。所有转移步骤均用市售的低绑定尖端(康宁)进行。
随后使用IdT (Integrated DNA Technology)设计的ACTA1引物和探针,对每种DNA浓度的2µl进行qPCR分析,并与原始稀释系列的2µl(每次qPCR运行总DNA输入= 2 ng至0.002 ng)进行比较。
实验结果
比较三种不同的PCR板:
- a)具有由4抗性低结合PP聚合物制成的管子的PCR板
- b)具有由替代PP聚合物制成的管的PCR板和
- c)竞争对手E提供的市面上可买到的低装订版
图2显示了不同DNA浓度的Ct值。蓝线为未在PCR管中孵育的对照DNA,红线为所述PCR管中孵育的DNA。ΔCt用绿色表示。
对于不结合任何可检测的DNA迹线的塑料材料,红色和蓝线应该是相同的(对于Δct= 0),其不结合任何可检测的DNA迹线(缩小差异可能导致移液不准确)。
4抗性低结合材料(A)表示几乎是理想的图案,唯一具有0.44循环的较小偏差为0.002ng /μl的最低DNA浓度为0.44次循环。
并联测试的替代内部PP聚合物(B)揭示了具有最低DNA浓度的ΔCt的显着DNA结合,用于最低DNA浓度。从竞争对手E(c)的商业上可获得的“低结合”PCR板接收令人惊讶的类似模式。
结果清楚地显示了4韧低结合PP聚合物的优越性能,表明在敏感应用如下一代测序样品制备方面具有优势。
基因组DNA在不同温度下的低结合PP聚合物的结合
对4韧低结合聚丙烯进行了进一步的实验。
使用小鼠基因组DNA(溶解在5 mM Tris-HCl pH 8.0)而不是ACTA1片段,在相同的实验条件下重复上述实验,测试三种不同的孵育温度(反应混合物的典型储存温度为4℃,酶反应的典型温度为37℃,酶变性的典型温度为65℃)。使用KAPA SYBR Fast qPCR Master Mix对相同DNA浓度进行qPCR比较。
图3显示了从4℃温育所取的示例性标准曲线,显示出4个不同输入浓度的CT值,用于孵育的样品与对照。其他温度的结果是可比的。
表1显示了所有不同实验条件下的Ct值——确认了在8个不同试管中共孵育240分钟的样品与不受PCR塑料表面影响的对照样品之间几乎没有差异。
CT值 | Ct SD | ΔCt | |
培养温度:4°C | |||
20 ng / rxn | 没有孵化19.97 | 没有孵化0.01 | -0.2 |
孵化后19.77 | 孵化后0.01 | ||
2 ng / rxn | 没有孵化22.93 | 没有孵化0.08 | -0.06. |
孵育22.87后 | 孵化后0.05 | ||
0.2 ng / rxn | 没有孵化26.44 | 没有孵化0.03 | -0.06. |
孵化后26.38 | 孵化后0.05 | ||
0.02 ng / rxn | 没有孵化29.61. | 没有孵化0.14 | 0.25 |
孵化后29.86 | 孵育0.10 | ||
孵化温度:37°C | |||
20 ng / rxn | 没有孵化19.85 | 没有孵化0.02 | -0.21 |
孵化后19.64 | 孵化后0.05 | ||
2 ng / rxn | 没有孵化22.93 | 没有孵化0.06 | -0.16 |
孵育22.77后 | 孵化后0.05 | ||
0.2 ng / rxn | 没有孵化26.28. | 没有孵化0.03 | 0.10 |
孵化后26.37 | 孵化后0.05 | ||
0.02 ng / rxn | 没有孵化29.49 | 没有孵化0.45 | 0.08 |
孵育29.57后 | 孵化后0.36 | ||
孵化温度:65°C | |||
20 ng / rxn | 没有孵化18.51. | 没有孵化0.04 | -0.73 |
孵育17.78后 | 孵化后0.01 | ||
2 ng / rxn | 没有孵化21.41 | 没有孵化0.003 | -0.16 |
孵化后21.26 | 孵化后0.02 | ||
0.2 ng / rxn | 没有孵化24.69. | 没有孵化0.13 | -0.18 |
孵化后24.51 | 孵化后0.03 | ||
0.02 ng / rxn | 没有孵化28.57 | 没有孵化0.23 | -0.42 |
孵化后28.15 | 孵化后0.56 |
表1:基因组DNA在不同温度下对不同温度的低结合PP聚合物的结合 - CT值对所有不同的实验条件
实验数据:通过我们的日本合作伙伴Nippon Genetics友好提供不同温度下的DNA粘附的数据。
以下低绑定板可订购现成的,但额外的产品具有超低绑定性能,可根据要求提供。阅读少▲